摘要：Obiettivi: la ricerca dei virus enterici in matrici ambientali, soprattutto nei reflui urbani, risulta di grande interesse sia per la valutazione del rischio di natura virale sia per compiere studi epidemiologici.Lo scopo di questo lavoro è stato l’applicazione parallela di diverse tecniche attualmente in uso in virologia clinica a isolati citopatogeni ambientali al fine di ottenere una precisa identificazione degli agenti rilevati.Metodi: sono stati analizzati 21 campioni di aerosol, provenienti da impianti di depurazione di reflui civili a fanghi attivi, e risultati citopatogeni in colture di cellule BGM.Dopo una nuova semina in “shell vials”, su tre linee cellulari continue per mettere in evidenza eventuali differenze nello spettro di citopatogenicità. Per l’identificazione degli isolati virali, sono state adottate in parallelo: microscopia elettronica, tecniche biomolecolari di amplificazione genica, elettroforesi su gel di poliacrilamide (PAGE), test immunoenzimatici, sieroneutralizzazione.Risultati: la semina in “shell vials” ha confermato lapresenza di particelle virali infettive in tutti i campionitranne uno; inoltre ha permesso di ridurre iltempo di comparsa dell’effetto citopatico a 3-4 giornicontro i 6-8 giorni necessari seminando in fiasche.La microscopia elettronica ha individuato la presenzadi particelle enterovirus-simili in 18 dei 21campioni e di virioni della famiglia Reoviridae in 8.La positività dei campioni è stata ottenuta, inoltre,con la RT-PCR, per 2 campioni di enterovirus e 2 direovirus e con la PAGE in 6 campioni. Il presentestudio ha portato ad un’identificazione sufficientementecerta di reovirus in 2 campioni e di enterovirusin 1 campione.Conclusioni: l’identificazione di isolati ambientali si conferma molto complessa e richiede l’utilizzo e l’integrazione di più tecniche con specificità e sensibilitàdiverse; le tecniche biomolecolari, ed in particolare la PCR, appaiono di grande utilità a patto di utilizzare primer il più possibile rappresentativi dei virus di derivazione umana. È infatti necessario individuare specificamente i virus patogeniper l’uomo per una corretta valutazione del rischio sanitario.
Loading...
