摘要:O novo ENEM é um instrumento para avaliação de larga escala, mas concentra significativas situações de aprendizagem. Por isso, suas questões precisam apresentar profundidade diversificada e estar alinhadas com o material de orientação. Este trabalho buscou analisar o alinhamento entre a Matriz de Referência do novo ENEM e o contexto de suas questões de Biologia, presentes nas edições de 2014 a 2019. Para análise do alinhamento entre Matriz de Referência do novo ENEM e as questões aplicadas no exame, foram considerados os seguintes objetos: questões de Biologia, competências e habilidades da área Biologia presentes na Matriz de Referência. Esses objetos foram classificados utilizando o método de Webb, Nível de Profundidade do Conhecimento (DOK), em 4 esferas possíveis: Relembrar, Entender, Analisar e Avaliar. Dentre os resultados, constatou-se que as competências e habilidades presentes na Matriz de Referência indicaram um incentivo de resolução mais elaborado, como a prevalência do DOK Analisar e do DOK Avaliar em comparação às demais categorias. Porém, diante da análise das questões de Biologia, observou-se alto percentual em categorias menos complexas como o DOK Relembrar. Pode-se afirmar que as questões de Biologia do novo ENEM prevalecem abordagens que se baseiam na capacidade de memorização do estudante. Por isso, acreditamos na necessidade de mais itens com situações crítico-interpretativas, para o efetivo alinhamento com a Matriz de Referência.