摘要:مقدمه: استرپتوکوکوس پیوژنز کلونیزهکننده پوست و گلو در بسیاری از انسانها است. این باکتری علاوه بر عفونتهای چرکی حاد، مسئول عوارض و بیماریهای خودایمن بعد از عفونت شامل آرتریت واکنشی، گلومرولونفریت و تب روماتیسمی میباشد. روش استاندارد طلایی برای شناسایی استرپتوکوکوس پیوژنز، کشت است. اما بهدليل زمانبر بودن روش مذکور و اهمیت تشخیص سریع آن، استفاده از روشهای مولکولی مفید است. تکنیک LAMP روش نسبتاً جدیدی است که حساسیت و اختصاصیت بالایی در تشخیص عفونتهای باکتریایی دارد. هدف از این مطالعه، استفاده از تکنیک LAMP براساس ژن ستوکروم اکسیداز (oxaA) برای شناسایی استرپتوکوکوس پیوژنز است.مواد و روشها: روش LAMP با 6 پرایمر برای توالی خاص oxaA در استرپتوکوکوس پیوژنز طراحی شد. غلظتهای مختلفی از سولفات منیزیم، دزوکسی نوکلئوتید تریفسفات و پرایمرها برای بهینهسازی روش استفاده گردید.نتایج: واکنش LAMP با غلظتهای 10 uM از هر کدام از پرایمرهای LB، LF،F3 و B3، 40 uM از هر کدام از پرایمرهای FIP و BIP، 0.4mM dNTPs و 8mM MgSo4 طی 1 ساعت و در دمای 63 درجه سانتیگراد راهاندازی گردید.نتیجهگیری: روش LAMP در مقایسه با PCR روش سریعی برای شناسایی استرپتوکوکوس پیوژنز میباشد.
其他摘要:Introduction: Streptococcus pyogenes is the leading cause of suppurative infections and the non suppurative sequela as acute rheumatic fever, acute glomerulonephritis, and reactive arthritis. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay is a rapid and sensitive method to detect bacterial infections. Therefore, we developed a LAMP assay for rapid detetion of S.pyogenes infections based on cytochrome oxidase gene(oxaA).Methods: The LAMP assay was established using six primers targeting cytochrome oxidase gene in S.pyogenes. The performance of assay was evaluated with different concentration of MgSo4, dNTPs and primers.Results: LAMP assay was developed with concentrations of 10 uM from F3, B3, LB ad LF primers, 40 uM of each FIP and BIP primer, 0.4mM of dNTPs and 8mM of MgSo4 at 63°C for 1h.Conclusion: The LAMP assay to detect S.pyogenes is rapid method in comparison to PCR.