摘要：Актуальность . Профилактика пневмококковой инфекции в РФ осуществляется импортными полисахаридными и коньюгированными вакцинами без учета циркуляции клинически значимых изолятов, что приводит к росту распространения ранее редких генетических линий и серотипов, не входящих в состав вакцин, а также не защищает от носительства. Проводится разработка серотипнезависимых вакцин на основе протективных белков и вариантов цельноклеточных вакцин, способных обеспечить перекрёстный протективный эффект против пневмококка. Цель работы . Исследование протективных свойств поверхностных белоксодержащих антигенов, выделенных из иммуногенного штамма S. pneumoniae 6B № 296 и определение их влияния на ключевые эффекторы врождённого иммунитета. Материалы и методы . S. pneumoniae 6B № 296 культивировали в полу-синтетической среде в стационарных условиях при 5% CO 2 в течение 5-7 ч. Из инактивированных бактериальных клеток получали экспериментальный исходный белоксодержащий препарат - водный экстракт (В/Э), из которого выделяли фракцию 30-100 kDa (ФР), и из стерильного надосадка культуральной жидкости - белоксодержащий препарат - супернатант (С/Н); в препаратах выявляли содержание белка. Иммунобиологические свойства изучали после двукратной внутрибрюшинной иммунизации мышей линии BALB/c. Протективную активность определяли после заражения вирулентными штаммами S. рпеитожае серотипов 6В № 1121 и 3 № 3. Фагоцитарную активность изучали по количеству гранулоцитов, поглотивших убитые нагреванием FITC-меченые клетки S. aureus. Экспрессию Толл-подобных рецепторов (TLRs) и субпопуляционную структуру лимфоцитов селезенок мышей исследовали после окрашивания FITC/PE-мечеными моноклональными антителами с помощью проточной цитометрии. Статистический анализ материалов проведен с применением параметрических и непараметрических методов с использованием пакета прикладных программ «Statistica for Windows», ver. 7.0 (Stat Soft, Inc). Результаты . Установлен про-тективный эффект ФР при заражении вирулентными штаммами гомологичного (6B № 1121) и гетерологичного серотипов (3 № 3); С/Н защищал мышей при заражении штаммом 3№ 3. Все исследуемые препараты приводили к увеличению количества фагоцитирующих клеток (наибольший эффект отмечен при иммунизации ФР и С/Н) и стимулировали численность TLR2 и TLR4 позитивных клеток (наблюдалось повышение количества TLR2-экспрeссирующих клеток при иммунизации Ф/Р по сравнению с В/Э). При изучении иммунофенотипа лимфоцитов мышей отмечено, что препараты индуцировали экспрессию эффекторов врождённого и адаптивного иммунитета. Выводы . В результате проведённых исследований показано, что протективная поверхностная белоксодержащая фракция с ММ 30-100 kDa является наиболее активным, из испытанных экспериментальных препаратов, стимулятором врожденного и адаптивного иммунитета и требует дальнейшего изучения для определения возможности использования при разработке серотипнезависимой пневмококковой вакцины.
其他摘要：Relevance . Prevention of pneumococcal infection in the Russian Federation is carried out by imported polysaccharide and conjugated vaccines without taking into account the circulation of clinically significant isolates, which leads to the growth of previously rare genetic lines and serotypes that are not part of the vaccines, and does not protect against the carriage. Serotype-independent vaccines are being developed based on protective proteins and variants of whole-cell vaccines capable of providing a cross-protective effect against pneumococcus. Objective . Investigation of the protective properties of surface protein-containing antigens isolated from the immunogenic strain S. pneumoniae 6B No. 296 and their influence on key effectors of innate immunity. Materials and methods . S. pneumoniae 6B No. 296 was cultured in a semi-synthetic medium under stationary conditions at 5% CO 2 for 5-7 hours. From inactivated bacterial cells, the experimental initial protein-containing preparation was obtained - an aqueous extract (A/E), from which a 30-100 kDa fraction (FR) isolated, and from the sterile culture supernatant, the protein-containing preparation - supernatant (S/N); in the preparations, the protein content was determined. Immunobiological properties were studied after double intraperitoneal immunization of BALB/c mice. The protective activity was determined after infection with virulent strains of S. pneumoniae serotypes 6B No. 1121 and No. 3. Phagocytic activity was studied by the number of granulocytes that absorbed heat-killed FITC-labeled S. aureus cells. The expression of Toll-like receptors (TLRs) and the subpopulation structure of mouse spleen lymphocytes were investigated after staining with FITC/PE-labeled monoclonal antibodies using flow cytometry. Statistical analysis of materials was carried out using parametric and non-parametric methods using the software package «Statistica for Windows», ver. 7.0 (Stat Soft, Inc). Results . The protective effect of FR upon infection with virulent strains of homologous (6B No. 1121) and heterologous serotypes (3 No. 3) was established; S/N protected mice when infected with strain 3 No. 3. All the studied drugs led to an increase in the number of phagocytic cells (the greatest effect was observed upon immunization with FR and S/N) and stimulated the expression of TLR2 and TLR4 positive cells (there was an increase in the number of TLR2-expressing cells during immunization with FR compared with A/E). When studying the immunophenotype of mouse lymphocytes, it was noted that the preparations induced the expression of effectors of innate and adaptive immunity. Conclusions . As a result of the studies, it was shown that the protective surface protein-containing fraction with MM 30-100 kDa is from tested experimental preparations the most active stimulator of innate and adaptive immunity, and requires further study to determine the possibility of using the serotype-independent pneumococcal vaccine in the development.
