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  • 标题:Extracción de ADN y una prueba inical de primers en Pinus pseudostrobus Lindl. Para marcadores AFLP
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  • 作者:Gabriela Orozco Gutiérrez ; Ramón del Val Díaz ; Mario González Chavira
  • 期刊名称:Foresta Veracruzana
  • 印刷版ISSN:1405-7247
  • 出版年度:2010
  • 卷号:12
  • 期号:2
  • 页码:15-20
  • 语种:Spanish
  • 出版社:Recursos Genéticos Forestales
  • 摘要:Se desarrollo un método de extracción de ADN simple, rápido y de alto rendimiento para Pinus pseudostrobus Lindl. del área semillera establecida en Jerahuaro, Michoacán para la producción de semilla de calidad. Se implementaron herramientas moleculares (AFLP) para identificar su relación genética inter-especie. Es muy importante contar con el protocolo de extracción y purificación de ADN estandarizado para la especie de interés, debido a que este proceso constituye una etapa clave en todos los estudios de genética molecular. El procedimiento estuvo basado en el método Doyle y Doyle (1987) y Vázquez (1996) con modificaciones. Para determinar la calidad del ADN extraído se utilizó gel de agarosa al 1% y por medio de una digestión de ADN con enzimas de restricción Eco R1 y Mse 1 se realizó la prueba de amplificación. Se obtuvo buena calidad y cantidad de ADN para análisis AFLP. El ADN fue completamente digerido por las enzimas de restricción. Se realizaron amplificaciones de AFLP para evaluar la idoneidad de ADN mediante ocho combinaciones, cuatro del tipo Mse 1 y cuatro del tipo Eco R1. Todas las combinaciones probadas mostraron un alto número de bandas y alta resolución en las mismas.
  • 其他摘要:A DNA extraction method simple, rapid, high yield was developed for Pinus pseudostrobus Lindl. from a seed area established in Jerahuaro, Michoacán for the production of quality seed. Molecular tools were implemented (AFLP) to identify the inter-species genetic relationship. It is very important to have the protocol for DNA extraction and purification standardized to the species of interest, because this process is a key step in all molecular genetic studies. The method is based on Doyle and Doyle (1987) and Vázquez (1996) with modifications. To determine the quality of extracted DNA was used agarose gel 1% and by DNA digestion with restriction enzymes Eco R1 and Mse 1 was tested by amplification. With the extraction procedure used was obtained good quality and quantity of DNA for AFLP analysis. The DNA was completely digested by restriction enzymes. AFLP amplifications were performed to assess the suitability of DNA by eight combinations, four Mse 1 type and four of Eco R1 type. All combinations tested showed a high number of bands and high resolution in them.
  • 关键词:AFLP; CTAB; extracción de ADN; P. pseudostrobus; iniciadores. AFLP; CTAB; DNA extraction; Pinus pseudostrobus; primers.
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